PCR實驗室布局、通風系統設計及壓力控制
PCR實驗室又叫基因擴增實驗室。PCR是聚合酶鏈式反應(PolymeraseChainReaction)的簡稱。是一種分子生物學技術,用于放大特定的DNA片段,可看作生物體外的特殊DNA復制。用于基因檢測,具有高度敏感性、特異性、快速、簡單等特點,能將傳統方法難以檢測的極少數病毒DNA片段擴增百萬倍以上,從而大大提高疾病的診斷水平。它不僅可用于基因分離、克隆和核酸序列分析等基礎研究,還可用于疾病的診斷或任何有DNA,RNA的地方,又稱無細胞分子克隆或特異性DNA序列體外引物定向酶促擴增技術。
一、PCR實驗室平面布局
PCR擴增檢驗實驗室原則上分為三個單獨的工作區域:試劑貯存和準備區、標本制備區、擴增和擴增產物分析區。為避免交叉污染,進入各個工作區域必須嚴格遵循單一方向進行,即只能從試劑貯存和準備區→標本制備區→擴增和擴增產物分析區。各實驗區之間的試劑及樣品傳遞應通過傳遞窗進行。
二、實驗室空調通風系統設計及壓力控制
PCR實驗室并沒有嚴格的凈化等級要求,但是為避免各個實驗區域間交叉污染的可能性,宜采用全送全排的氣流組織形式。同時,要嚴格控制送、排風的比例以保證各實驗區的壓力要求。
1、試劑貯存和準備區
該實驗區主要進行的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應混合液的制備。試劑和用于樣品制作的材料應直接運送至該區,不得經過其他區域。試劑原材料必須貯存在本區內,并在本區內制備成所需的貯存試劑。對與氣流壓力的控制,本區應對外界保持微正壓。
2、標本制備區
該區域主要進行的操作為樣本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應管和測定DNA的合成。本區的壓力梯度要求為:相對于鄰近區域為正壓,以避免從鄰近區進入本區的氣溶膠污染。另外,由于在加樣操作中可能會發生氣溶膠所致的污染,所以應避免在本區內不必要的走動。
3、擴增和擴增產物分析區
該區域主要進行的操作為DNA擴增和擴增片段的測定。此外,已制備的DNA模板(來自樣本制備區)的加入和主反應混合液(來自試劑貯存和制備區)制備成反應混合液等也可在本區內進行。本區的壓力梯度要求為:相對于鄰近區域為負壓,以避免氣溶膠從本區漏出。為避免氣溶膠所致的污染,應盡量減少在本區內的不必要的走動。個別操作如加樣等應在超凈臺內進行。
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